ELISA試劑盒應(yīng)用中效果的評(píng)價(jià)
更新時(shí)間:2016-07-18 點(diǎn)擊次數(shù):1297次
由于凈化過(guò)程中引入的溶劑,可能會(huì)降低待測(cè)組分的濃度或者不適宜直接分析,需要去除全部有機(jī)溶劑。即ELISA試劑盒前處理步驟中把樣本在60℃氮?dú)庀麓蹈桑儆脧?fù)溶液溶解干燥殘留物。
濃縮方式:氮?dú)獯蹈沙s、壓縮空氣吹干除雜。
注意:
1在吹干樣本之前,用甲醇清洗針頭,防止雜質(zhì)干擾。
2在吹樣本時(shí),針頭應(yīng)在液面上空,避免與樣本接觸,防止產(chǎn)生交叉污染。
3樣本吹干后應(yīng)立即取下,避免吹的時(shí)間過(guò)長(zhǎng),影響zui終檢測(cè)結(jié)果。
4不同的藥物,吹干后樣本的保質(zhì)期不同,提倡待樣本回到室溫后立即復(fù)溶。
5凈化
經(jīng)過(guò)提取的待測(cè)組分中通常含有一些會(huì)干擾試劑盒中抗原抗體反應(yīng)的雜質(zhì)或者是含有與待測(cè)物結(jié)構(gòu)相似的雜質(zhì)。將待測(cè)組分與雜質(zhì)分離的過(guò)程,我們稱為ELISA試劑盒中樣本的凈化。
1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml4℃過(guò)一夜。次日,ELISA試劑盒棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡(jiǎn)稱洗滌,下同)。
2.加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔,陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔)。
3.加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時(shí),ELISA試劑盒洗滌。
4.加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。