目前ELISA試劑盒檢測的樣本中,除了細(xì)胞上清外,還有比較大的一部分是血清和血漿樣本。對于ELISA試劑盒客戶來說,在實(shí)驗(yàn)中可能用到不同的樣本,如何辨別所購的ELISA試劑盒能否測手中的樣本呢?對于zui常見的細(xì)胞上清,我們大家知道,培養(yǎng)細(xì)胞過程中,無特別情況一般是10%的牛血清加入培養(yǎng)基中,經(jīng)過培養(yǎng)后,細(xì)胞的吸收消耗,zui后細(xì)胞上清中蛋白含量會很少,而且對于一般牛血清生產(chǎn)的廠家來說,在生產(chǎn)過程中已經(jīng)去除了,所以對一般ELISA而言,不會影響抗體抗原的結(jié)合。
1、如廠家沒有提供專門用于血清血漿樣本的緩沖液,那么只要用已知濃度的待測指標(biāo)蛋白加入所測種屬的血清作為樣本加樣和用已知濃度的待測指標(biāo)蛋白加入PBS緩沖液中同時(shí)檢測對比,ELISA試劑盒即可知道該試劑盒是否可以直接用來測血清血漿樣本。
2、如廠家沒有提供專門用于血清血漿樣本的緩沖液,只是有一個(gè)籠統(tǒng)的或統(tǒng)一的稀釋液,那么只要用已知濃度的待測指標(biāo)蛋白加入所測種屬的血清直接加樣和用已知濃度的待測指標(biāo)蛋白加入廠家提供的統(tǒng)一的緩沖液中同時(shí)檢測,也可得出該試劑盒是否可直接用來檢測血清血漿樣本。
3、如廠家提供專門用于血清血漿樣本的緩沖液,可用已知濃度的待測指標(biāo)蛋白加入所測種屬的血清直接加樣和用緩沖液按說明書分別加樣,也可得出結(jié)果。
如該種類型ELISA試劑盒樣本總量如為100μl的話,一般而言,會是50μl的樣本加樣量和50μl的特定的緩沖液。
在使用試劑盒的過程,可將已知濃度的蛋白用血清或血漿調(diào)配到試劑盒標(biāo)定的檢測限的zui高值的2倍,加入50μl做兩孔,一孔補(bǔ)入常規(guī)的50μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液,ELISA試劑盒一孔補(bǔ)入50μl樣本分析緩沖液,即可區(qū)分出效果來,有時(shí)候,有些廠家為了達(dá)到“消除"的效果,在樣本分析緩沖液中加入待測目標(biāo)蛋白,為了鑒別出這種情況,也可直接加入樣本分析緩沖液做一孔,同時(shí)做對比,這樣可試出試劑盒中的針對血清血漿樣本的緩沖液是否真的有效。
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