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ELISA試劑盒酶免疫測(cè)定
更新時(shí)間:2015-06-02   點(diǎn)擊次數(shù):1205次

 由于各種抗原成份,包括小分子的半抗原,ELISA試劑盒均可用以制備特異性的抗血清或單克隆抗體,利用此抗體作為試劑就可檢測(cè)標(biāo)本中相應(yīng)的抗原,因此免疫測(cè)定的應(yīng)用范圍極廣,在臨床檢驗(yàn)中可用于測(cè)定:

1) 體液中的各種蛋白質(zhì),包括含量極少的蛋白質(zhì)如甲胎蛋白等。

2) 激素,包括小分子量的甾體激素等。

3) 抗生素和藥物。

4) 病原體抗原,HBsAg、HBeAg等。

5) 另外,也可利用純化的抗原檢測(cè)標(biāo)本中的抗體,例如抗-HBs等。

5.標(biāo)記的免疫測(cè)定

    如上所述,免疫測(cè)定是一種很敏感的測(cè)定方法,抗原抗體反應(yīng)后直接測(cè)定形成的沉淀或濁度,敏感度可達(dá)5~10μg/ml,但在臨床檢驗(yàn)中,某些待測(cè)物在標(biāo)本中的含量遠(yuǎn)低于這一水平,因此要尋找增加敏感度的方法。標(biāo)記的免疫測(cè)定是將檢測(cè)試劑中的抗原或抗體用可微量測(cè)定的物質(zhì)加以標(biāo)記,通過(guò)測(cè)定標(biāo)記物來(lái)提高敏感度。在放射免疫測(cè)定和中,ELISA試劑盒標(biāo)記物分別為放射性核素和酶,zui后用測(cè)定放射性和酶活力來(lái)計(jì)算待檢物的量,敏感度可比直接測(cè)定沉淀物提高數(shù)百至數(shù)千倍。在標(biāo)記免疫測(cè)定中,一般加入過(guò)量的標(biāo)記試劑以保證與待測(cè)物*反應(yīng)。以標(biāo)記抗體(Ab ※)檢測(cè)抗原(Ag)為例,反應(yīng)式如下:

Ag+ Ab※ →AgAb※+Ab※

    在反應(yīng)產(chǎn)物中有與Ag結(jié)合的Ab※和游離和Ab※ ,如不將兩者分離而測(cè)定標(biāo)記物,測(cè)得的結(jié)果將為兩者之和。因此,游離標(biāo)記物與結(jié)合標(biāo)記物的分離是標(biāo)記免疫測(cè)定中的重要步驟??刹捎枚喾N手段,固相載體是其中之一。如將抗原或抗體包被在固相載體上,然后再與標(biāo)記的抗原或抗體直接反應(yīng),結(jié)合的標(biāo)記物被固定在載體上,而游離的標(biāo)記物留于溶液中。這樣可以通過(guò)洗滌將游離的Ab※除去,結(jié)合標(biāo)記物的測(cè)定可在固相上進(jìn)行。IgM抗體一般為保護(hù)性抗體具有免疫性。因此IgM抗體的測(cè)定,對(duì)某些傳染病如甲型肝炎有較高的臨床診斷價(jià)值。
1.3 抗原抗體反應(yīng)
1.3.1 可逆性
抗原與抗體結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物的過(guò)程是一種動(dòng)態(tài)平衡,其反應(yīng)式為:
Ag+Ab→Ag·Ab
抗體的親和力(affinity)是抗原抗體間的固有結(jié)合力,可以用平衡常數(shù)K表示:
K=[Ag·Ab]/[Ag][Ab]
    高親和力抗體的抗原結(jié)合點(diǎn)與抗原的決定簇在空間構(gòu)型上非常適合,兩者結(jié)合牢固,不易解離。解離后的抗原或抗體均能保持原有的結(jié)構(gòu)和活性,ELISA試劑盒因此可用親和層析法來(lái)提純抗原或抗體。在抗血清中,特異性的IgG抗體僅占總IgG中的極小部分。用親和層析法提取的特異性抗體,稱(chēng)為親和層析純抗體,應(yīng)用于免疫測(cè)定中可得到更好的效果。

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