ELISA試劑盒變質(zhì)是ELISA實(shí)驗(yàn)中比較常見(jiàn)的問(wèn)題,那么,ELISA試劑盒變質(zhì)是因?yàn)槭裁茨??是什么影響了ELISA試劑盒質(zhì)保?一旦變質(zhì)會(huì)有什么影響呢?今天為大家詳細(xì)分析下。
1、樣本因素
標(biāo)本干擾因素包括內(nèi)源性干擾因素和外源性干擾因素,前者包括類(lèi)風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、異嗜性抗體、自身抗體、后者包括標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、標(biāo)本凝固不全、冷凍標(biāo)本的反復(fù)凍融等。
2、試劑因素
不同批次的ELISA試劑在制作過(guò)程中很難保證質(zhì)量一致,即使是通過(guò)批批檢的項(xiàng)目其檢測(cè)結(jié)果也存在差異,因此必須選擇和訂購(gòu)長(zhǎng)批號(hào)的試劑,并保證保存條件。 嚴(yán)格執(zhí)行這一標(biāo)準(zhǔn)可以避免因試劑批號(hào)改變而重新建立質(zhì)控體系及重新評(píng)估試劑的復(fù)雜過(guò)程,并且能夠保證結(jié)果的穩(wěn)定性;對(duì)于效期短、使用率低的試劑,應(yīng)當(dāng)小量分裝,每次使用則取分裝部分即可,避免反復(fù)凍融造成試劑的失效。
3、標(biāo)本復(fù)查
ELISA試劑盒手工檢測(cè)過(guò)程復(fù)雜,影響因素較多,即使室內(nèi)質(zhì)控在控,也可能因孔間差異而造成結(jié)果的差異,因此加大復(fù)查力度是保證結(jié)果準(zhǔn)確性的可靠方法,比如對(duì)HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等項(xiàng)目的可疑、弱陽(yáng)性標(biāo)本及少見(jiàn)模式的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行復(fù)查。
4、操作因素
ELISA操作步驟復(fù)雜,操作不當(dāng)將引起較大的誤差。加樣、溫育、洗滌、顯色、比色。
5、方法學(xué)的影響
ELISA測(cè)定模式包括以下幾種:雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競(jìng)爭(zhēng)抑制法,其中競(jìng)爭(zhēng)抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作時(shí)差所引起的競(jìng)爭(zhēng)等因素的影響,結(jié)果重復(fù)性較差,質(zhì)量較難控制。
6、灰區(qū)的設(shè)置
通常情況下,ELISA定性實(shí)驗(yàn)以“陽(yáng)性"和“陰性"來(lái)報(bào)告結(jié)果,兩者間有一條分界線被稱為“陽(yáng)性判斷值"(cut-off value,CO值),這是定性免疫測(cè)定結(jié)果報(bào)告的依據(jù)。
7、常表示結(jié)果的常用方法
⑴.定性測(cè)定。
⑵.半定量測(cè)定 結(jié)果一般以滴度表示。
⑶.定量測(cè)定 即用已知量的標(biāo)準(zhǔn)品作一系列稀釋后進(jìn)行ELISA測(cè)定,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,結(jié)果以量或單位表示。在ELISA試劑盒定量檢測(cè)中每一塊反應(yīng)板都必須繪制相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
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