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上海晶抗生物操作細(xì)胞株鋪板的實(shí)驗(yàn)小技巧方法
更新時(shí)間:2022-10-19   點(diǎn)擊次數(shù):1226次

做細(xì)胞生物學(xué)試驗(yàn),細(xì)胞鋪板是比較常見(jiàn)的一個(gè)試驗(yàn)。但是有很多人鋪得不是很均勻,要么中心密周?chē)?,要么周?chē)苤行南 S龅竭@些情況該怎么辦呢?接下來(lái)就為大家介紹一下在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中操作細(xì)胞鋪板的技巧。

 

一般是96孔板,每孔是加100微升細(xì)胞懸液,從孔的左邊靠近底部加入,加完半邊板后,將未加的細(xì)胞懸液混一下再繼續(xù)加剩下的半邊板子,都加完后蓋上蓋子,左手悄悄扶住板的左邊,右手悄悄敲擊板的右邊緣,留意掌握力度,太強(qiáng)或次數(shù)太多會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞集成堆,將板順時(shí)針旋轉(zhuǎn),順次敲擊剩下三個(gè)邊,靜置約5分鐘,放入37度培育箱。


6孔板、12孔板或24孔板,均可采用將個(gè)孔加入少量無(wú)血清培育基,晃動(dòng)滋潤(rùn)整個(gè)孔底,然后用移液槍吸至第二孔,同樣辦法滋潤(rùn)孔底,其它孔一次類(lèi)推,這樣整個(gè)孔底都是濕潤(rùn)的,細(xì)胞懸液會(huì)平鋪在整個(gè)孔底,加細(xì)胞懸液的時(shí)候能夠防止加在中心,中心細(xì)胞多,而加在周邊晃勻后會(huì)出現(xiàn)周邊細(xì)胞多中心少的現(xiàn)象,細(xì)胞渙散較均勻,留意加完細(xì)胞懸液后要放工作臺(tái)靜置一下。細(xì)胞懸液加完后,將細(xì)胞培育板舉高,對(duì)著燈光,從底部往上看,看細(xì)胞有沒(méi)有抱團(tuán)。然后從底部敲擊,使之渙散。假如試驗(yàn)室有平板振動(dòng)器的話,建議用這個(gè)儀器稍振動(dòng)一下,作用不錯(cuò),振幅小,頻率高。


細(xì)胞要盡量打散,大部分呈單個(gè)狀態(tài)。離心后,要充沛懸浮。還有轉(zhuǎn)移到六孔板后,需求晃動(dòng),晃的時(shí)候不要讓細(xì)胞液轉(zhuǎn)圈,不然細(xì)胞就全被帶到中心去了,就會(huì)不均勻。


一瓶細(xì)胞長(zhǎng)滿后,正常處理,在培育瓶里吹勻,然后鋪6孔板,每孔2毫升,鋪完之后不必調(diào)查直接用酒精棉擦拭,然后放到培育箱里,輕微的左右前后各三圈?;旧?4小時(shí)之后再調(diào)查,每孔的細(xì)胞都會(huì)很均勻。


計(jì)算好所需求的悉數(shù)液體量和細(xì)胞量,混勻后,加到六孔板里,六孔板按橫8字型晃,顯微鏡下調(diào)查,假如不均勻,按上述辦法再晃。假如細(xì)胞未計(jì)數(shù)直接種的話,在種六孔板的過(guò)程中,隨時(shí)晃一下混勻用的瓶子。放在水平板面上先上下移動(dòng),再左右移動(dòng),每個(gè)方向5到6次,但搖晃后直接放入培育箱中,不要再做過(guò)多的運(yùn)動(dòng),不然很容易就又聚到中心去了。

 

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