1、原代細胞 組織塊培養(yǎng)法
(1)按照前述方法選材,將組織剪成或切成1mm3巨細的小塊,并參與少量培養(yǎng)基使組織濕潤。
(2)將小塊均勻涂布于瓶壁,每小塊距離0.2 cm~0.5cm,一般在25mL培養(yǎng)瓶(底面積為17.5cm2)可接種20~30小塊為宜,小塊放置后,輕輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶,使瓶底朝上,然后于瓶內(nèi)參與適量培養(yǎng)基蓋好瓶塞,將瓶傾斜放置在37℃溫箱內(nèi)。
(3)培養(yǎng)2~4小時,待小塊貼附后,將培養(yǎng)瓶緩慢翻轉(zhuǎn)平放,靜置培養(yǎng),動作要輕,嚴禁搖擺和來回振蕩,以防因為激動而使小塊漂起而形成培養(yǎng)失利,若組織塊不易貼壁可預先在瓶壁涂一薄層血清、胎汁或鼠尾膠原等。
2.消化培養(yǎng)法
該方法是選用前述的消化松散法,原代細胞 將阻止細胞生長的細胞間質(zhì)(包含基質(zhì)、纖維等)去除,使細胞松散形成細胞懸液,然后分瓶培養(yǎng)。
3.懸浮細胞培養(yǎng)法
關(guān)于懸浮生長的細胞,如白血病細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和細胞無需消化,可選用低速離心別離,直接培養(yǎng),或經(jīng)細胞分層液別離后接種培養(yǎng)。