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影響ELISA試劑盒實驗成果的原因
更新時間:2018-03-23   點(diǎn)擊次數(shù):1052次

ELISA試劑盒以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對實驗的檢測作用影響較大,如不留意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等成果。
將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給同行帶來一些啟示,進(jìn)步實驗質(zhì)量。
下面剖析Elisa實驗操作中可能影響成果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法
一、挑選試劑
挑選質(zhì)量的檢測試劑,嚴(yán)厲依照試劑闡明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
二、 孵育
可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸騰,吸附于孔壁,難于清洗*; 2) 孵育時刻人為延伸,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反響孔周圍,難以清洗*。
解決辦法:
1) 貼封片或加蓋; 2) 按闡明過程嚴(yán)厲控制操作時刻。
三、洗板
可能原因:
1) 選用手藝洗板,孔與孔之間液體穿插。 2) 選用半自動洗板機(jī)洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針阻塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板作用差。 3) 反響板過多形成洗板等候時刻長。
解決辦法:
1) 確保洗液注滿各孔,洗板針疏通,洗完板后在吸水紙(挑選干凈、無或少塵的吸水資料)上輕輕拍干; 2) 合理安排,或多用幾臺洗板機(jī)。
四、加樣
可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本別離欠好即進(jìn)行加樣; 2)手藝操作中,加樣板過多形成加樣后放入孵箱前等候時刻過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺起孔外。
解決辦法:
1)標(biāo)本為血清:將血液先天然寄存1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:有必要使用含抗凝劑的血液標(biāo)本搜集管,采血后有必要當(dāng)即倒置采血管混合5-10次,放置一段時刻后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要儲存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 2)加樣后及時放入孵箱。3)加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板外表輕拭吸干。 4)如果選用AT或其他全自動加樣,挑選FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 5)標(biāo)本較多時,請分批操作。

 

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